Tips Voor Het Oplossen Van Problemen Met PCR En Primer Dimer

Haal vandaag nog de beste Windows-reparatietool. 100% tevredenheidsgarantie of uw geld terug.

Er kan een foutreactie verschijnen die aangeeft dat de PCR en primerdimeer gecorrigeerd kunnen worden. Er zijn verschillende manieren om dit probleem, dat we nu gaan bespreken, te verminderen.We verhogen die gloeitemperatuur.Verhoog de tijd/temperatuur die is gekoppeld aan de denaturatie van het model.Lagere primerconcentratie (10 pmol wordt als zeker goed beschouwd)Gebruik hierin de nieuwste PCR-activator zoals DMSO.Kijk in de buurt van uw model.Gebruik een versterkt kwaliteitslabel.

Cyclustijd en de weersomstandigheden Te weinig punten gebruikt Het gebruik van een te klein aantal PCR-motoren kan leiden tot inferieure versterking. Gebruik 20-35 cycli. Gebruik minder wanneer de concentratie van subroutinesequenties hoog is, en koester meer wanneer de concentratie van lusvariaties als laag wordt beschouwd. De verlengingsperiode is te kort Als de expansietijd meestal altijd te kort is, heeft het doelwit mogelijk niet genoeg tijd om effectief te reproduceren. Over het algemeen wil je mijn verlengingstijd tot een exclusieve minuut/kb. Vakantietijd was te kort Als de schitteringstijd van een persoon ongelooflijk kort is, krijgen de primers geen tijd om aan de kabeldoos te hechten. Gebruik een effectieve gloeitijd van minimaal 24 seconden. De gloeitemperatuur was te hoog Als ons gloeien het weer hoog is, kunnen er ook primers worden gevonden die niet aan de structuur kunnen hechten. Gewoonlijk wordt de annealingstemperatuur slechts bepaald door maar 5°C lager dan typisch de Tm van de primer. Gebruik de exacte tool op www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc om het grootste deel van de primer te berekenen, namelijk Tm). Laagste Tm voor beginners bij het berekenen van de stralingsomgeving. Optimaliseer deze gloeitemperatuur voor een betere nauwkeurigheid met thermische helling. Als de temperatuur van de m verwijderprimer gekoppeld aan 5°C dicht bij de proxy-temperatuur (72°C) ligt, overweeg dan om een ​​1-staps PCR-protocol uit te voeren. Het gloeivocht mag de aanbiedingstemperatuur niet overschrijden. Denaturatiecondities te laag In het algemeen, als deze denaturatietemperatuur te laag is, zal een nieuw DNA niet snel volledig worden gedenatureerd en kan de amplificatie-efficiëntie gemakkelijk laag zijn. Gebruik een denaturatieverwarmer van 95 °C. De denaturatietijd was plus lang Als de denaturatietijd te lang is, kan het DNA degraderen. Gebruik voor opstartdenaturatie momenteel 3 minuten ongeveer 95°C; voor de denaturatiecyclus, via het begin van gebruik 30 een tijdje bij 95°C. Vervormingstijd was al absurd kort
Als de mogelijkheid samen met denaturatie klein is, kan het DNA niet volledig worden gedenatureerd en zal de specifieke amplificatie-efficiëntie laag zijn. Gebruik voor de 1e denaturatie 3 minuten om het polymerase te activeren; Om de lay-out tijdens de cyclus te wijzigen, neem 30 sec Redenen gerelateerd aan PCR-componenten dNTP-concentratie wordt te hoog Als je ziet dat de concentratie van dNTP zeker veel hoog is, treedt Mg2+-depletie op. In de uiteindelijke reactie van een persoon moet elke dNTP soms aanwezig zijn in een hoeveelheid van 300 µM. dNTP-sterkte was te laag Elk moet aanwezig zijn in een concentratie die het meest kenmerkend is voor 200 µM in de uiteindelijke reactie. PCR heeft een hoog GC-gehalte in het product (>65%) GC-verrijkte PCR-producten zijn doorgaans moeilijk te amplificeren. Om de ondersteuning te verbeteren, verlengt het gloeien de temperatuur. Pas momenteel de temperatuur van de gloed aan met mijn nieuwe temperatuurgradiënt om veel details te krijgen. U kunt DMSO of extra destabilisatoren van de secundaire omtrek toevoegen (niet meer dan 10%). Model was oud of zelfs beschadigde of vastzittende remmers Matrix, vrij totaal, zal waarschijnlijk worden weggesneden of kan PCR-remmers bevatten. Verdun sjabloon als remmers in veel gevallen worden vermoed; Gebruik anders het nieuwe model en maak ook de fietsen strakker. Probeer een controlereactie uit te voeren met behulp van een geweldig zuiver plasmide met sjabloonselectie om te beslissen of er echt remmende effecten aanwezig zijn. Primers hebben onzuiverheden gedetecteerd Onzuiverheden in primers vermijden PCR. Gebruik gedemineraliseerde primers of ontgiftingsprimers. Je kunt proberen beide primers te verminderen als er zeker remmende effecten zullen zijn, maar voeg minimaal 0,02 µM van elke primer toe. Niet genoeg stijl om te reageren Er kan onvoldoende versterking optreden en als de hoeveelheid template in het begin te klein is. Verhoog het aantal gecreëerd door loopbacks in een paar simpele stappen, of verhoog het aantal Template.DNTP

indien mogelijk. onzuiverheden werden gebruikt Onzuiverheden boven dat dNTP-mengsel kunnen daarentegen onvolledige amplificatie of PCR-remming veroorzaken. Gebruik dNTP van hoge kwaliteit. Primerconcentratie, maar het leek erg hoog Het gebruik van een overmatige concentratie van primers kan de kans vergroten dat primers niet-specifieke binding aangeven wanneer u ongewenste services in of variërend van arrays nodig heeft. Gebruik aan het einde van de reacties goed ontworpen inleidingen 5 at.2 – 1 µM. Zorg er ook voor dat de fabrikant de juiste hoeveelheid verstrekt. Primerfocus was te laag geweest Als het concentratiebereik te laag is, kan gloeien vaak inefficiënt zijn. Gebruik aan het einde van de specifieke reactie goed ontworpen inleidingen drie samen met een concentratie van 0,2 – 1 µM. Controleer ook of de fabrikant specifieke correcte detectie heeft verstrekt. Enzymniveaus waren veel laag Als het polymerasedoel te ondermaats is, zullen alle niet-PCR-producten volledig worden gerepliceerd. De optimale concentratie van een specifiek enzym hangt af van mijn complexiteit van lengte en grootte. Primers zijn plotseling ontworpen of gesynthetiseerd door de man of vrouw of fabrikant Zorg ervoor dat de primers hebben bewezen in de juiste volgorde en klasse voor de patternWell te zijn. Gebruik het ontwerpprogramma van de nationale overheid om herhalende patronen, sterk complementaire regio’s, enz. te vermijden. Voer een BLAST-zoekopdracht uit om primers te verwerven die pseudogenen kunnen versterken of omdat ze bepaalde ongewenste regio’s kunnen primen. Gebruik de hele tool www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc met voortdurende zoutconcentratie html en 0,2–1 µM om beginners (afhankelijk van de effectcondities) Tm te laten berekenen. Gebruik de laagste Tm verbonden met de primers. Het doel was ongelooflijk lang

PCR-componentconcentraties en/of cyclische condities zullen onvoldoende kunnen zijn voor aanvullende ambities. Optimaliseer de bestaande testontwikkeling opnieuw en/of verleng de duur van de PCR-stappen, met name de stap toevoegen.

Herstel Windows-fouten en bescherm uw computer tegen bestandsverlies, malware en hardwarestoringen

PCR And Primer Dimer Troubleshooting Tips
PCR Utöver Primer Dimer Felsökningstips
Советы по устранению неполадок с ПЦР и димерами праймеров
Sugerencias Para La Resolución De Problemas De PCR Y Dímeros De Cebadores
Tipps Zur Fehlerbehebung Bei PCR Und Primer-Dimer
Dicas De Solução De Problemas De PCR Para Primer Dimer
Wskazówki Dotyczące Rozwiązywania Problemów Z PCR I Primer Dimer
Suggerimenti Per La Risoluzione Dei Problemi Di PCR E Primer Dimer

Bookmark the permalink.