Ik Doe Mijn Best Om DNA Southern Blot Op Te Lossen

Haal vandaag nog de beste Windows-reparatietool. 100% tevredenheidsgarantie of uw geld terug.

De afgelopen weken is een lezer een bepaalde foutmelding tegengekomen bij het oplossen van problemen met Southern DNA-blots. Dit probleem kan zich voordoen als gevolg van een aantal factoren. Laten we dit hieronder delen.Het negatieve aspect van Southern blotting is dat het voor het grootste deel relatief meer DNA van hoge kwaliteit vereist.

We zijn momenteel vastbesloten om het chromosoom van dat D4Z4-gebied (3-30 kb) te lokaliseren met behulp van in het algemeen DIG-probe p13E-11 tot 4q. ZoBp maat 850 bp vervaardigd in-house gebruik van gepubliceerde primers en Roche PCR DIG Probe Synthesis. De rest van de belangrijkste log als –

Digest onderneemt actie met 5 μg DNA ‘s nachts, presteert direct bij 0,4% met Gel-TAE met 18-24 uur.

Waarom wordt DNA eigenlijk gedenatureerd bij Southern blotting?

Denaturatie, die optreedt in een alkalische omgeving, kan de binding verbeteren van op een verkeerde manier geladen thymine-derivaten van DNA met een positief tegenovergestelde aminogroep die betrokken is bij het membraan, evenals ze onafhankelijk maken in afzonderlijke DNA-strengen omdat oudere hybridisatie met de sonde ( zie hieronder), naast het vernietigen van het resterende RNA, kunnen ze nog steeds aanwezig blijven in uw huidige DNA.

Week naast EtBr-gel gedurende 32 minuten. om feeds te bekijken.

Depurinatie in 0,25 M HCl gedurende tien minuten, via 0,4 M NaOH, slechts één M NaCl gedurende 14 minuten.

Breng tijdens het slapen een positieve lading aan op elk soort geladen nylonmembraan met betrekking tot 0,4 M NaOH-oplossing.

dna south blot troubleshooting

Was hier met weinig strengheid om buffer tegen te gaan (2X SSC, 0,1% SDS), dan gewoon UV-crosslinking.

20 milliliter Roche DIG Hyb easy voorverwarmen op tweeënveertig°C, voorverwarmen (30 min op 42°C).

Denatureer alle sondes van 40 µl bij 4 °C gedurende min., voeg 5 toe tot 20 ml verse Easy Hyb.

Vervang door Pre-Hyb-Hyb en incubeer ‘s nachts bij 42°C.

Was het membraan een paar minuten in 2X buffer met zeer lage hardheid

Spoel het membraan driemaal bij 70 ° C gemiddelde stevigheid (buffer 0,5X SSC, 0,1% SDS). Minstens 15.

Spoelbarrièrespoeling (0,1 M maleïnezuur p, 0,15 M NaCl, 0,3% Tween-20, pH 7,5) gedurende 2 minuten.

Hoe ontdekt Southern blot methylatie?

Southern blot-hybridisatie De methyleringsaankondiging van de restrictie-voorspellingsplaats zou zeker kunnen worden bepaald door de gebieden van de banden van DNA-clutter die de restrictieplaatsen flankeren te onderzoeken. De vergroter van deze methode ligt in kwantitatieve resultaten die de hoeveelheid tussen afval en onverteerde DNA-moleculen weerspiegelen.

Verwijder 1% maleïnezuursleutel om verstopping te voorkomen (0,1 M maleïnezuur, 0,15 M NaCl, ph 7,5). We gebruiken een voornamelijk op melk gebaseerd anti-agens van Amersham.

Blokkeer het membraan gedurende veertig minuten.

Voeg voor u anti-DIG-antilichamen toe aan de verse afvaloplossing en incubeer vervolgens gedurende 30 minuten met de membraanlaag.

dna south soak troubleshooting

Spoel het membraan met spoeling, zie gratis X 2 gedurende 15 minuten.

Incubeer all-over herkenningsbuffer 3 gedurende een paar minuten (0,1 M Tris, 0,1 M NaCl, pH 9,5)

Wat zijn de 3 meest essentiële stappen voor het uitvoeren van een Southern-blot?

Stap 1. DNA-splitsing.2 fase van huidgels elektroforese.Stap 3 blotten.Stap 4 Label de belangrijkste sonde.Stap 5 hybridisatie en wassen.Stap vijf Ontdekking.

Incubeer met CDP-Star in sensorbuffer 5 gedurende minuten.

Afbeelding met röntgenfilm.

We slaagden erin om DIG door middel van PCR in een bepaalde sonde op te nemen en ontvingen ook moeiteloos signalen van de overdracht die met een niet-gelabelde versie naar onze sonde in het onderzoek werd gebracht. Maar elke keer dat genomisch DNA wordt geïntroduceerd, zien we slechts één bijlage zonder onderscheidbare banden (foto bijgevoegd). Wat kan er worden gewijzigd om dit probleem extra te controleren?

  • Over ons bedrijf
  • Servicevoorwaarden
  • Gegevensbescherming
  • CommEntities
  • Sponsoring
  • © 1999-2008 Internet Protocol, alle revisies voorbehouden.

    De totaaloplossing voor al uw Windows-gerelateerde problemen

    Is uw computer traag en onstabiel? Wordt u geplaagd door mysterieuze fouten en maakt u zich zorgen over gegevensverlies of hardwarestoringen? Dan heb je Reimage nodig – de ultieme software voor het repareren van Windows-problemen. Met Reimage kun je een groot aantal problemen met slechts een paar klikken oplossen, waaronder het gevreesde Blue Screen of Death. De applicatie detecteert ook crashende applicaties en bestanden, zodat je hun problemen snel kunt oplossen. En het beste van alles: het is helemaal gratis! Dus wacht niet langer - download Reimage nu en geniet van een soepele, stabiele en foutloze pc-ervaring.

  • Stap 1: Download en installeer Reimage
  • Stap 2: Open de applicatie en klik op de knop Scannen
  • Stap 3: Selecteer de bestanden of mappen die u wilt herstellen en klik op de knop Herstellen

  • Er zijn verschillende problemen waardoor het signaal minder wordt weergegeven dan bij de laatste lekke band. Raadpleeg de bronnen direct na de checklist om hints uit te sluiten:

    Voldoende DNA geladen voor hardlopen met hyaluronzuur (10 μg, g) 5 Was het DNA verder volledig ongebruikt vóór elektroforese? Werd dit geëlektroforetiseerde DNA gedenatureerd en geneutraliseerd door overdracht?

    Was de overdracht voltooid? (Vlek gelatine geschikt na overdracht om het resterende DNA te beoordelen.)

    Was het DNA intact? (Was je gezien, de membraanlaag verwijderd en meerdere keren onderzocht?)

    Is het vuil voldoende uitgerekt aan de film blootgesteld?

    Als een van onze antwoorden op alle belangrijke vragen ja is, kunnen de problemen met het selecteren van het juiste signaal relevant zijn voor de levensduur waarmee een soort probe hybridiseert met doelsequenties die beschikbaar zijn op de weefsellaag. Als een soort probe is afgeleid van een andere goede krachtige soort dan het gebruikte DNA, kan een slechte hybridisatie het einde zijn van het gebrek aan homologie met betrekking tot de probe en het concentraat-gen van de cyclus. Door de gezichtsscherpte te verminderen, na hybridisatie te wassen en/of het aandeel van introductietijden bij de ontwikkeling van autoradiogrammen te vergroten, kan een verzwakt signaal vaak worden versterkt. Als alternatief kan het nodig zijn om een ​​specifieke probe of een groot aantal soorten tagging-methodes voor de probe uit te proberen.

    Een hoge opbrengst van de continue werkende blot duidt bijna altijd op onvoldoende verstopping tijdens de prehybridisatie en hybridisatieberekeningen, of slecht wassen van de kale direct na hybridisatie. Om achtergrondgeluiden met succes te elimineren, moet u in het algemeen de duur van het gedenatureerde DNA van zeevruchtensperma dat is gekocht voor elk van onze voorbehandelings- en vervolgens hybridisatieoplossingen verlengen en/of de ernst van de doekjes na de hybridisatie versnellen door simpelweg het zoutgehalte te verlagen of de temperatuur te verhogen. Als RNA-probes (riboprobes) worden gecontroleerd, kan het temperatuurniveau van de hybridisatiewassingen meer te wijten zijn aan het feit dat 55 ° C hoog moet zijn – vermijd hybridisatie-informatie.

    Herstel Windows-fouten en bescherm uw computer tegen bestandsverlies, malware en hardwarestoringen

    I’m Having Trouble Troubleshooting DNA Southern Blot
    У меня возникают проблемы при устранении неполадок ДНК Саузерн-блот
    Mam Problem Z Rozwiązywaniem Problemów Z DNA Southern Blot
    Je N’arrive Pas à Résoudre Le Problème Du Southern Blot D’ADN
    Ho Problemi Con La Risoluzione Dei Problemi Di DNA Southern Blot
    DNA Southern Blot 문제를 해결하는 데 문제가 있습니다.
    Estou Tendo Dificuldades Para Solucionar Problemas De DNA Southern Blot
    Jag Lägger Ut Felsökning Av DNA Southern Blot
    Ich Habe Probleme Bei Der Fehlerbehebung Beim DNA Southern Blot

    Bookmark the permalink.